GT115化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述：GT115化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
GT115菌株，是專門用來克隆含有發(fā)夾結(jié)構(gòu)（Hairpin）或重復(fù)序列等DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的基因序列的大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種SbcCD蛋白復(fù)合體，可以識(shí)別DNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并將其切除；將sbcC和sbcD兩個(gè)基因突變，增強(qiáng)了發(fā)夾結(jié)構(gòu)DNA的穩(wěn)定性。

更新時(shí)間：2022-01-18

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù)：771

留言詢價(jià)聯(lián)系我們

詳情介紹

品牌	其他品牌	貨號(hào)	BFNC86026
規(guī)格	10x100ul/50x100ul	供貨周期	現(xiàn)貨
主要用途	僅用于科研	應(yīng)用領(lǐng)域	醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

GT115化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86026-01(10×100ul)/BFNC86026-02(50×100ul)

GT115： 100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl

保存條件(保質(zhì)期)： -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^-mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15?lacX74 recA1 rpsL (Str^R) endA1 ?dcm uidA(DMluI)::pir-116?sbcC-sbcD

產(chǎn)品說明

GT115菌株，是專門用來克隆含有發(fā)夾結(jié)構(gòu)（Hairpin）或重復(fù)序列等DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的基因序列的大腸桿菌菌株。大腸桿菌中存在一種SbcCD蛋白復(fù)合體，可以識(shí)別DNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并將其切除；將sbcC和sbcD兩個(gè)基因突變，增強(qiáng)了發(fā)夾結(jié)構(gòu)DNA的穩(wěn)定性。同時(shí)在大腸桿菌基因組中引入uidA(DMluI)::pir-116，使GT115可以表達(dá) 兀蛋白，含有R6Kg ori復(fù)制子的質(zhì)粒( pCpG-mcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常復(fù)制。該菌株還含有具有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recA)突變，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性。

青旗生物生產(chǎn)的GT115感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>2×10⁸cfu/μg DNA。

GT115化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

操作方法

1. GT115感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基(S.O.C.營養(yǎng)豐富，可提高轉(zhuǎn)化效率)。

4. 37℃，225 rpm復(fù)蘇60分鐘。

5. 5000 rpm離心1分鐘收菌，留取100 μl左右上清吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C. 或LB培養(yǎng)基上。

6. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞適宜在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。混入目的DNA時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

2. 此菌株具有鏈霉素抗性，擁有這種抗性的質(zhì)粒無法使用。